Tạp chất Tirzepatide

Tạp chất Tirzepatide|Kiểm soát tạp chất Tilpeptide|Tổng hợp tùy chỉnh tạp chất và xác nhận cấu trúc|Khoa học-Peptit

Tirzepatide Kiểm soát tạp chất - cho GLP-1/GIP kép-nghiên cứu chất lượng thuốc mục tiêu, báo cáo thuốc gốc. Khoa học-Peptide cung cấp sự tổng hợp tùy chỉnh các tạp chất liên quan đến tilpeptide, bao gồm peptide xóa, tạp chất bị oxy hóa, sản phẩm tẩy da chết bằng axit béo, chất làm mờ, v.v., cùng với dữ liệu xác nhận cấu trúc để hỗ trợ bạn. Chúng tôi có thể hỗ trợ nghiên cứu quang phổ tạp chất của bạn bằng dữ liệu xác nhận cấu trúc. Chào mừng bạn đến liên hệ với chúng tôi.

Tirzepatide (Tirzepatide) là chất chủ vận kép GLP-1/GIP mà Eli Lilly đã nghĩ ra và nó đã phát triển mạnh mẽ trong hai năm qua. Nó có tác dụng hạ đường tốt và tác dụng giảm cân mạnh mẽ, được mệnh danh là phiên bản nâng cấp của “thần dược giảm cân”. Nhiều nhà sản xuất thuốc generic peptide trong nước đang nhìn chằm chằm vào nó - sau khi hết hạn bằng sáng chế, ai có thể kiểm tra chất lượng nghiên cứu trước tiên, ai sẽ có cơ hội lấy được thuốc generic đầu tiên.

 

Tuy nhiên, chất lượng của tilpeptide không dễ nghiên cứu. Nó phức tạp hơn simethicone, với 39 axit amin, chuỗi bên axit béo (axit eicosanedioic) và một chất liên kết. Các tạp chất có thể xuất hiện trong quá trình tổng hợp cao hơn nhiều so với các peptide thông thường. Các peptide bị thiếu, tạp chất oxy hóa, sản phẩm thải axit béo, chất làm mờ, tạp chất liên quan đến-liên kết đều phải có sự kiểm soát, mỗi tạp chất phải rõ ràng.

 

Chúng tôi đã tích lũy được nhiều kinh nghiệm trong việc tổng hợp các tạp chất peptide phức tạp. Chúng tôi chuyên nghiên cứu về tilpeptide và chúng tôi biết những khó khăn trong hồ sơ tạp chất của nó và những hạng mục kiểm soát thiết yếu là gì. Chúng tôi có thể tùy chỉnh việc tổng hợp các biện pháp kiểm soát tạp chất tilpeptide khác nhau theo nhu cầu của bạn, với dữ liệu xác nhận cấu trúc và giúp bạn thiết lập phương pháp để bạn ít có khả năng bị cấp chất bổ sung khi nộp đơn.

Cấu trúc phân tử của tilpeptide xác định rằng cấu trúc tạp chất của nó phức tạp hơn nhiều so với cấu trúc của các peptide thông thường. Khi chúng tôi thực hiện nghiên cứu về tạp chất, chúng tôi chủ yếu tập trung vào các loại sau:

Thiếu peptit
39 axit amin, bất kỳ axit nào bị thiếu trong quá trình tổng hợp, đều là tạp chất. Thời gian lưu của các peptide bị thiếu trên HPLC được phân bổ rộng rãi, với độ phân cực khác nhau của các peptide bị thiếu ở các vị trí khác nhau. Một số bị thiếu ở đầu N-, một số ở giữa và một số ở gần vị trí gắn axit béo. Chúng tôi đã nhận được đơn đặt hàng từ một khách hàng về 15 peptide bị thiếu ở các vị trí khác nhau để khoanh vùng tất cả các tạp chất có thể bị thiếu trong quy trình của họ.

Tạp chất oxy hóa
Gặp trong chuỗi tilpeptide dễ bị oxy hóa thành sulfoxide và sau đó thành sulfone. Các tạp chất bị oxy hóa thường xuất hiện trong các nghiên cứu về độ ổn định và phát triển sau một thời gian. Chúng tôi đã thực hiện một so sánh, trong điều kiện tăng tốc trong một tháng, đỉnh oxy hóa có thể tăng lên hơn 0,3% mà không thể kiểm soát được.

Sản phẩm thải axit béo
Đây là tạp chất đặc trưng của tilpeptide. Chuỗi bên axit béo của nó (axit eicosanedioic) được gắn với lysine thông qua một liên kết và sự biến đổi này có thể bị loại bỏ một phần trong quá trình tổng hợp hoặc bảo quản, dẫn đến axit béo-loại bỏ tạp chất. Vấn đề hơn nữa là sự bong tróc có thể xảy ra ở các vị trí khác nhau - giữa axit béo và chất liên kết hoặc giữa chất liên kết và peptit - dẫn đến các tạp chất khác nhau. Chúng tôi đã tổng hợp một số tạp chất liên quan đến axit béo-cho khách hàng của mình, từ loại bỏ hoàn toàn đến chỉ một phần nhỏ.

Dimer/polyme
Hai hoặc nhiều phân tử tilpeptide kết hợp với nhau tạo thành dạng dimer hoặc cao hơn. Trọng lượng phân tử của dimer gấp đôi so với đỉnh chính và nó thường là đỉnh rộng trên HPLC, do đó nó phải được tách biệt và tinh chế đặc biệt trước khi có thể sử dụng làm đối chứng. Chúng tôi đã chuẩn bị các dimer và phải mất nhiều vòng tinh chế để đạt được độ tinh khiết trên 95%.

tạp chất liên quan đến trình liên kết-
Quá trình biến đổi axit béo của tilpeptide sử dụng một trình liên kết (ví dụ: -Glu, PEG, v.v.) và bản thân trình liên kết này có thể tạo ra các phản ứng phụ trong quá trình tổng hợp, tạo ra tạp chất với các trình liên kết bị thiếu hoặc không đầy đủ. Loại tạp chất này không được tìm thấy trong các peptide thông thường, nhưng chỉ có ở tilpeptide, cần được nghiên cứu cụ thể.

Tạp chất đã khử amit
Asparagine (Asn) và glutamine (Gln) dễ dàng bị khử amit trong điều kiện axit hoặc nhiệt, tạo thành các chất đồng phân. Có một số Asn và Gln trong chuỗi tilpeptide và tạp chất khử amit thường xuất hiện trong thử nghiệm phân hủy cưỡng bức, do đó sản phẩm đối chứng phải được sử dụng để xác định tạp chất.

Đồng phân không đối quang
Trong quá trình tổng hợp chuỗi dài, các axit amin riêng lẻ có thể trải qua quá trình phân biệt chủng tộc, tạo ra các đồng phân không đối quang. Hàm lượng loại tạp chất này thường không cao nhưng khi khai báo, chuyên gia sẽ hỏi, tốt nhất nên có sản phẩm đối chứng để xác nhận.

Nhiều tạp chất trong số này không thể mua được và cần phải được tổng hợp tùy chỉnh. Chúng tôi đã thực hiện rất nhiều dự án về việc tùy chỉnh tạp chất tilpeptide, bao gồm tất cả các loại trên.

Việc loại bỏ chuỗi peptide
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, có xác nhận MS và NMR. Chúng tôi đã tổng hợp một bộ peptide có khoảng cách 5 axit amin từ đầu N-đến đầu cuối C-.

Tạp chất oxy hóa
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% và chúng tôi có thể cung cấp phổ LC{1}}MS để xác nhận mức độ oxy hóa. Sulfoxide và sulfone được phân tách bằng HPLC và chúng ta có thể thực hiện cả hai.

Sản phẩm thải axit béo
Đây là một trong những tạp chất khó xử lý nhất trong tilpeptide. Chuỗi axit béo có thể bị tắt hoàn toàn hoặc có thể bị tắt một phần (ví dụ: thiếu một số nguyên tử cacbon cuối cùng). Chúng ta có thể tổng hợp một loạt các biến thể cho các vị trí khác nhau của chuỗi. Trong một trong những dự án phức tạp nhất mà chúng tôi đã thực hiện, khách hàng yêu cầu chúng tôi tổng hợp một tạp chất có 8 nguyên tử cacbon bị thiếu trong chuỗi axit béo và chúng tôi phải mất hai tháng để làm đúng.

Dimer
Các chất điều chỉnh độ sáng được hình thành bằng cách-liên kết chéo hoặc tương tác không{1}}cộng hóa trị có thể được điều chế bằng các phương pháp khác nhau và được tách và tinh chế để cung cấp các biện pháp kiểm soát có độ tinh khiết cao. Việc tinh chế các dimer tốn nhiều công sức nhưng chúng tôi có kinh nghiệm để biết cách tách các monome.

tạp chất liên quan đến trình liên kết-
Trình liên kết ( -Glu, PEG, v.v.) có thể bị thiếu hoặc không đầy đủ, dẫn đến một loạt tạp chất liên quan. Chúng tôi có thể tổng hợp các biến thể khác nhau với các trình liên kết bị thiếu, trình liên kết rút ngắn hoặc trình liên kết không khớp và giúp bạn xây dựng quang phổ của các tạp chất đó.

Tạp chất đã khử amit
Đối với các vị trí Asn và Gln trong trình tự, chúng ta có thể chuẩn bị các biện pháp kiểm soát tạp chất đã khử amit bằng cách phân hủy cưỡng bức hoặc tổng hợp có mục tiêu. Sự khác biệt về trọng lượng phân tử sau khi khử amit chỉ là 1, MS không dễ phân biệt nên chúng tôi thường sử dụng NMR hoặc các điều kiện sắc ký đặc biệt để xác nhận.

Các tạp chất tùy chỉnh khác
Nếu bạn tìm thấy một tạp chất mới chưa biết trong nghiên cứu của mình, chúng tôi có thể giúp bạn phân tích cấu trúc và tổng hợp nó. Hãy gửi mẫu cho chúng tôi, chúng tôi sẽ thực hiện phân tích LC{1}}MS, suy ra cấu trúc, sau đó tổng hợp định hướng, sau đó so sánh thời gian lưu và phổ khối để xác nhận sự đồng thuận. Chúng tôi đã thực hiện quá trình này nhiều lần và tỷ lệ thành công khá cao.

Phát triển và xác nhận phương pháp phân tích
Khi thiết lập phương pháp HPLC hoặc LC{0}}MS, cần phải kiểm soát tạp chất để định vị, xác định độ tách, xác minh phạm vi tuyến tính và khả năng phục hồi. Nếu không có điều khiển, quá trình xác thực phương thức sẽ bị thiếu một phần. Nhiều khách hàng yêu cầu chúng tôi làm một số tạp chất chính trước để thiết lập phương pháp, sau đó từ từ bù đắp phần còn lại.

Phép đo khối phổ không đồng nhất
Khi một loại thuốc gốc được công bố, cần phải phân tích định tính và định lượng toàn diện các tạp chất trong quá trình và các sản phẩm thoái hóa. Vị trí, hàm lượng và cấu trúc của từng tạp chất cần được xác nhận bằng sản phẩm kiểm soát. Chúng tôi đã thấy tờ khai thông tin được gửi đến để điền vào, chín trong số mười lần là những tạp chất của phần này không hiểu được.

Nghiên cứu độ ổn định
Trong các thử nghiệm tăng tốc và độ ổn định lâu dài, cần phải xác định sản phẩm xuống cấp nào chiếm ưu thế và xu hướng nội dung là gì. Với việc kiểm soát tạp chất, chúng tôi có thể định lượng và giám sát một cách chính xác. Một khách hàng đang thực hiện chế phẩm ổn định tilpeptide và nhận thấy rằng đỉnh thoái hóa tăng rất nhanh trong điều kiện tăng tốc, vì vậy chúng tôi đã phân tích và tổng hợp nó bằng MS để xác nhận cấu trúc, sau đó khách hàng yên tâm báo cáo.

Thử nghiệm phát hành hàng loạt
Sau khi thương mại hóa, mỗi lô API hoặc công thức cần phải được kiểm tra chất được đề cập. Kiểm soát tạp chất là công cụ thiết yếu để thử nghiệm phát hành.

Thông tin về khai báo thuốc generic
Nghiên cứu tạp chất là một phần quan trọng của thông tin nộp hồ sơ. Việc cung cấp dữ liệu kiểm soát và lập hồ sơ tạp chất hoàn chỉnh giúp giảm đáng kể nguy cơ đưa ra đánh giá.

Trường hợp 1: một công ty dược phẩm, chương trình thuốc generic tilpeptide
Họ đang phát triển một phiên bản chung của tilpeptide và cần một bộ kiểm soát tạp chất hoàn chỉnh để xác nhận phương pháp. Chúng tôi đã tùy chỉnh 12 tạp chất cho chúng: 5 peptide bị thiếu, 2 tạp chất bị oxy hóa, 1 dimer, 2 sản phẩm loại bỏ axit béo và 2 tạp chất liên quan đến liên kết. Mỗi loại trong số chúng đều có độ tinh khiết trên 95% và đi kèm với dữ liệu MS và NMR. Người đứng đầu dự án cho biết: "Tạp chất của tilpeptide nhiều gấp đôi so với các peptide khác, nhưng bạn có thể tạo ra tất cả chúng và dữ liệu hoàn chỉnh, giúp chúng tôi tiết kiệm rất nhiều công sức." Sau đó, quá trình xác thực phương pháp của họ đã hoàn tất thành công và hiện họ đang chuẩn bị khai báo.

Trường hợp 2: Công ty CRO, lập hồ sơ tạp chất
Họ đã thực hiện một dự án nghiên cứu chất lượng về tilpeptide, đòi hỏi phải phân tích toàn diện các tạp chất trong quá trình. Họ đã gửi cho chúng tôi các mẫu peptide thô và chúng tôi đã thực hiện phân tích LC{1}}MS, suy ra cấu trúc có thể có của một số tạp chất chưa biết, sau đó tổng hợp chúng theo cách có mục tiêu và so sánh thời gian lưu và phổ khối, đồng thời xác nhận bốn tạp chất mới - hai trong số đó có liên quan đến trình liên kết- và hai trong số đó là các biến thể của quá trình phân hủy axit béo. Khách hàng đã sử dụng những dữ liệu này để tinh chỉnh hồ sơ tạp chất và đã được khách hàng chấp nhận thành công.

Trường hợp 3: Nghiên cứu độ ổn định, một công ty công nghệ sinh học
Họ đang kiểm tra tính ổn định của công thức tilpeptide và phát hiện ra rằng lượng sản phẩm thoái hóa tăng nhanh trong điều kiện tăng tốc, nhưng họ không biết nó là gì. Chúng tôi đã phân tích mẫu bằng LC-MS và giả định rằng đó là tạp chất khử amit tại một địa điểm Asn nhất định, sau đó tổng hợp mẫu đó theo cách có mục tiêu và xác nhận bằng cách so sánh. Họ đã thiết lập một xét nghiệm sử dụng biện pháp kiểm soát này và theo dõi chính xác xu hướng của sản phẩm thoái hóa. Sau này, khi họ nộp báo cáo, phần dữ liệu này đã được các chuyên gia nhấn mạnh và vì dữ liệu chắc chắn nên không có khoản bồi thường nào được đưa ra.

Tilpeptide là một sản phẩm phổ biến nhưng nghiên cứu tạp chất là một công việc tế nhị, đặc biệt là các sản phẩm tẩy da chết bằng axit béo và các tạp chất liên quan đến-liên kết mà nhiều nhà sản xuất không thể xử lý được. Nếu bạn đang thực hiện nghiên cứu chất lượng hoặc phát triển chung loại tilpeptide và cần kiểm soát tạp chất, vui lòng liên hệ với chúng tôi. Chúng tôi đã làm rất nhiều việc, chúng tôi biết khó khăn là gì và chúng tôi biết cách giải quyết.